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不想挑晶體?原位晶體篩選,測(cè)試和結(jié)構(gòu)解析方法

更新時(shí)間:2020-08-04點(diǎn)擊次數(shù):1662

  X射線晶體衍射儀經(jīng)歷了快速發(fā)展的10年,我們的光源越來(lái)越強(qiáng),探測(cè)器越來(lái)越快,數(shù)據(jù)處理越來(lái)越智能。儀器的進(jìn)步,大大提高了我們的晶體數(shù)據(jù)收集的效率和成功率,讓我們有更多的時(shí)間研究更深入的問(wèn)題。然而好的晶體永遠(yuǎn)都是一位的尤其對(duì)于蛋白質(zhì)晶體來(lái)說(shuō),獲得能夠衍射的晶體,仍然是主要的瓶頸之一。通常,為了檢驗(yàn)蛋白質(zhì)晶體的衍射質(zhì)量,我們需要從晶體板上挑出晶體,加上防凍劑,冷凍,放到衍射儀上,然后測(cè)試。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時(shí)耗力,而且我們沒(méi)有辦法避免這些操作過(guò)程對(duì)晶體衍射質(zhì)量的影響。

 

  幾年前,在同步輻射出現(xiàn)了原位晶體學(xué)的方法:快速,方便,可以直接在晶體生長(zhǎng)環(huán)境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學(xué)在晶體轉(zhuǎn)移過(guò)程中對(duì)晶體的損害。同樣在室內(nèi)衍射儀上,Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實(shí)現(xiàn)了原位晶體篩選評(píng)估:

 

  1.切換方便,5分鐘內(nèi)即可完成樣品臺(tái)的安裝和拆卸

  2.軟件控制,只需要鼠標(biāo)點(diǎn)擊即可快速對(duì)整個(gè)晶體板的每個(gè)結(jié)晶空進(jìn)行查看

  3.自動(dòng)多樣品隊(duì)列衍射實(shí)驗(yàn)

  4.快速表征晶胞參數(shù),識(shí)別晶體以及后續(xù)的數(shù)據(jù)收集

 

 ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

 

實(shí)驗(yàn)案例:GlucoseIsomerases晶體篩選和測(cè)試

 

儀器配置:D8VENTURE IµS 3.0,PHOTONII,ISX STAGE

樣品:GlucoseIsomerases結(jié)晶初篩48孔板,96個(gè)drop

總時(shí)間:1h(查看96個(gè)drop:30min;衍射28個(gè)晶體:30min;晶胞表征:10min)

 

1

晶體查看,挑選

 

 

 ▲ ISX Stage Software Control

 

2

確定晶體篩選隊(duì)列

 

 ▲ 挑選用于自動(dòng)篩選的晶體

 

3

自動(dòng)隊(duì)列晶體衍射實(shí)驗(yàn)

 

 

 ▲ 30min,6個(gè)孔,28個(gè)晶體樣品篩選結(jié)果

 

4

數(shù)據(jù)收集

 

室溫下,原位對(duì)4顆晶體進(jìn)行數(shù)據(jù)收集,然后合并數(shù)據(jù),使用MR解析結(jié)構(gòu)。

 

 

 ▲ 原位常溫?cái)?shù)據(jù)采集和結(jié)構(gòu)解析

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